（1）浸泡式：a.吸干或甩干孔内反应液；b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2min，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；d.吸干孔内液体。吸干应***，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；e.重复操作c和d，洗涤3-4次（按说明规定）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

 3).丙1酮分级分离：将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至－15℃的丙1酮，放置片刻，大鼠elisa试剂盒生产，在冰冻离心机中以4000r/min离心15min，弃去沉淀。上清液再加入0.8体积(按原上清液体积)-15℃丙1酮，(操作同上)，静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除去丙1酮。可得RZ值近于1的酶溶液。

  4).精制：将上步酶液适当稀释，滴加1mol/L硫酸锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10 -3 mol/L，5 000r/min离心10min，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤，离心，洗液与清液合并，分装于透析袋内，用水透析除盐，用微孔滤膜过滤，进行真空冰冻干燥(约得20mg)，产品呈米黄色纤维状松软物，HRP产品的RZ值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。 3 y; ~/ O3 z+ B& A1 d

（2）简易过1碘酸钠法% E0 O+ v: s2 T

      本法是以NaIO４先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗1体的产率高，将近70％的HRP和Ig结合，99％的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是目前***1常用的方法。7 p3 C# @， w9 L5 i% F% @7 r9 Z

1）原理：; h  d) X' E' u  _& O5 y

      经典的过1碘酸钠法中需采用二1硝基氟本封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，从而省去了二1硝基氟本封闭HRP步骤。HRP经NaIO4氧化后形成的醛化酶可与抗1体分子的氨基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH4(或乙醇1胺)还原生成稳定的酶标记抗1体。

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