武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ，如不将两者分离而测定标记物，测得的结果将为两者之和。因此，8-OHdG ELISA试剂盒，游离标记物与结合标记物的分离是标记免疫测定中的重要步骤。可采用多种手段，固相载体是其中之一。如将抗原或抗1体包被在固相载体上，然后再与标记的抗原或抗1体直接反应，结合的标记物被固定在载体上，而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的Ab※除去，结合标记物的测定可在固相上进行。

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12．水洗

用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。

13．分化

将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。

14．漂洗

切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。

15．脱水Ⅰ

切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各5min。

16、复染

用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。

伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏1木1精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。

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3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低，孵育时间过短 提高抗1体浓度，孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换试剂 操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致 使试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥） 室温太低，低于15℃ 若室温低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟（或4℃冰 箱过夜） 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验，设立阳性对照 组织中无抗原 设立阳性对照片，以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误

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