DNA电泳原理
生物大分子在一定pH条件下,通常带电荷,将其置于电场中,会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移,迁移速度称电泳速率。
电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比,与分子与介质的摩擦系数成反比。 摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。
在生理条件下,DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态,故DNA实际上呈多聚阴离子状态,在电场中向 正极方向迁移。
糖-磷酸骨架在结构上重复,故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。
如电场强度一定、电泳介质相同,电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。 构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。
琼脂糖水平电泳槽
琼脂糖水平电泳槽实验操作
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1. 根据电泳需要,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度,蛋白电泳槽,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉。
注意:总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意:必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml,并充分混匀(EB为危险品,不提倡使用)。
注意:EB是一种致癌物质。使用含有EB的溶液时,请戴用手套。EB在可见光下会分解。
5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5-8 mm 之间。
注意:不要产生气泡,溶液温度太高(>60℃),会使得水分
过分蒸发,改变凝胶离子浓度,影响电泳效果。
6.在室温下使胶凝固(大约30 分钟),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意:凝胶不立即使用时,用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存,或者放在制胶的缓冲液中,蛋白电泳槽报价,一般可保存2~5 天。
电泳的分类
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⑴ 区带电泳:电泳过程中,待分离的各组分分子在支持介质中被分离成许多条明显的区带,蛋白电泳槽哪家好,这是当前应用较为广泛的电泳技术。
⑵ 自由界面电泳: 这是瑞典Uppsala大学的科学家Tiselius较早建立的电泳技术,是在U形管中进行电泳,无支持介质,因而分离效果差,现已被其他电泳技术所取代。
⑶ 等速电泳:需使用***电泳仪,当电泳达到平衡后,各电泳区带相随,分成清晰的界面,并以等速向前运动。
⑷ 等电聚焦电泳:由两面性电解质在电场中自动形成pH梯度,当被分离的生物大分子移动到各自等电点的pH处聚集成很窄的区带。
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