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FISH技术作为连接分子生物学与细胞生物学的桥梁地位已为世人所公认。基因组原位杂交是以来源不同的亲本之一的总基因组DNA做探针,通过生物素,,荧光素等标记物标记后,再原位杂交到染色体制片上,接着通过与该标记物耦合的荧光素反应(标记物为荧光素则不需此步),检测该亲本染色体或染色体片段在中的存在状况。尽管目前FISH技术无法达到百100 完全杂交,特别是在应用较短cDNA探针时存在杂交效度率明显下降的问题,但随着各种新型分子探针以及更为精密的光学显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世,上述问题将会逐步得到解决,该技术的作用正变得日版益重要,应用领域也得以不权断扩展。FISH技术在泌尿系统研究领域的巨大潜力与光明前景将我们进入全新时代。
当然杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列。所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被。
杂交条件一般是37℃避光湿盒过夜。至少温度要严格控制在37-40℃,过高或者过低都是不适合的。孵育时间也不要***延长,一般18-20h就肯定够了,时间过久会造成自动解链,造成信号降低。
漂洗液的温度控制。很多人都觉得这个无所谓。小编个人认为FISH实验是一个对温度非常敏感的实验。保证漂洗液温度为37℃而不是室温,可能对于整个实验有比较良好的影响。