思特进(多图)-亚细胞定位





武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。




大豆[Glycine max(L.)Merrill]是我国主要的粮食作物和油料作物,但土壤盐渍化成为影响大豆生长和产量的主要限制因素之一。近年来,基因工程技术被广泛应用于提高植物的耐盐性,将抗逆基因导入优良大豆品种,培育抗逆高产新品系,为解决这一问题提供了新途径。目前已有多个耐盐相关基因应用于植物抗逆研究,其中Na+/H+逆向转运蛋白基因家族研究较为深入,其主要作用是通过将细胞质内的Na+外排到胞外或者将Na+区隔化到液泡中,来维持细胞内的Na+稳态和Na+/K+比相对稳定,从而减少盐胁迫对植株造成的伤害。但有关大豆Na+/H+逆向转运蛋白基因的生物学功能分析以及应用的研究还很少。本研究以超表达Gm NHX1基因的拟南芥及酵母nhx1缺失突变体为材料,通过非损伤微测技术、real-time PCR以及酵母互补试验,验证Gm NHX1基因的耐盐功能;借助基因法转化洋葱,观察Gm NHX1蛋白的亚细胞定位。在此基础上,利用根癌农介导的大豆子叶节转化法进行Gm NHX1基因的遗传转化。


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多胺作为一种多聚阳离子,在基因表达、蛋白活性等多层面调节细胞功能。多胺转运蛋白能够特异性介导多胺类物质跨膜运输,在调节多胺浓度、调控抗性基因表达、维持mRNA水平、增强植物抗逆性等方面具有重要功能。目前,已知拟南芥(Arabidopsis thaliana)LHR1基因编码质膜多胺转运蛋白AtPUT3,控制多胺的吸收,参与植物热胁迫早期反应中的分子调控过程,亚细胞定位,但水稻中(Oryza sativa),多胺参与植物热胁迫早期反应的具体分子机制尚不明确。通过序列对比,发现水稻Os02g47210和Os03g37984是拟南芥AtPUT3的功能同源基因。为了初步阐明水稻多胺转运蛋白LHR1在热胁迫早期防御反应及提高植物耐热性上的功能,本研究利用生物信息学、生化与分子生物学实验、遗传学等手段对水稻LHR1同源基因的功能进行初步研究,结果如下:1.了水稻OsLHR1(Os03g37984.1、2、3和Os02g47210)基因全长CDS,并对该基因编码的蛋白质进行有效的生物信息学分析,结果显示:Os03g37984有5种不同的剪切方式,编码5种OsPUT3蛋白。


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F-box蛋白通过在UPP(泛素-蛋白酶体途径)中特异识别底物蛋白而参与细胞周期调控、转录调控、细胞凋亡、信号转导等生命活动。很多研究结果表明F-box蛋白通过SCF复合体调节多种的信号转导途径,如IAA、JA、GA和乙烯的信号传导,并且与植物对非生物胁迫的响应有很大的关系。故其对植物抗逆性研究有重要意义。鹰嘴豆是大豆类作物,主要生长在干旱和半干旱地区。它具有生育期短,基因组小的特点。经过长时间的进化和对不良环境的适应,鹰嘴豆具有了丰富的耐旱、耐低温和耐盐碱等抗逆基因,因此具有其自身的优势来研究植物的抗逆机制。目前,鹰嘴豆在分子生物学方面的研究较为少。 本研究从EST库中挑选到两个F-box蛋白基因在干旱胁迫下表达,采用RACE技术其全长,并对目的基因进行了初步的生物信息学分析和转录水平的表达谱分析,旨在为进一步揭示鹰嘴豆F-box蛋白在植物的生长发育及在逆境信号传导中的作用奠定理论基础。 CarF-box1基因的开放阅读框(ORF)长1093bp,编码一条345个氨基酸残基的多肽,含有F-box结构域和Kelch结构域。其理论等电点为5.38,分子量为38.37kDa。CarF-box1基因不含有内含子。荧光定量PCR分析表明,CarF-box1在鹰嘴豆的根、茎、叶、花、成熟豆和成熟荚中均有表达,在花中表达极高。

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