美国出版协会(AAP)于1998年创建了DOI以来，制定了标准，并建立了相应的解析系统，目前在出版界得到了广泛和成功的应用。DOI已用于期刊、电子书、技术报告、标准等各种文献类型的标识，并向与文献相关的科学数据、版权、甚至作者标识等多元化方向发展。截止2008年4月底，DOI的注册量已超过了3，000多万个，应用DOI的出版社和学会有2，500多家，细胞佐剂，图书馆1，300多个。万方数据公司已获得了在中国注册DOI代理机构权。

抗原制备及纯化

抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。

在McAb的研制过程中，动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右，不但耗时长，而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法，大大缩短动物免0疫时间并减少了抗原的消耗量，为进一步组装患者肿0瘤组织及血0清中AFP水平检测的试剂盒打下良好的基础，为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的工具。




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