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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
试剂配制区(Ⅰ区):洁净的区域,PCR实验室,保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖,严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管。
DNA模板添加区(Ⅱ区):压力比Ⅰ区低,保证内部空气不外泄,以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。
扩增及PCR产物分析区(Ⅲ区):保持负压,使得内部空气不外泄,以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。操作时压力遵循Ⅰ区→Ⅱ区→Ⅲ区单一方向进行,PCR实验室建设,不可逆向进行。
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PCR实验室为什么要进行三区隔离?
PCR实验总是出现假阳性,明明没有加模板,结果却扩出了产物。如果这种现象频频出现,就要注意一下操作环境。这里涉及气溶胶的概念,气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,能在空气中滞留至少几个小时。
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PCR实验室通风系统及压力控制:各区域之间应具备单间的实验工艺流、气流、物流与人员流动,形成单向流程的保护屏障。避免实验室之间的相互干扰,也防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送风、排风的比例,以保证整个实验区的压力要求。
PCR实验室装饰:实验室围护结构应牢固,气密性好; 所有阴阳角宜采用圆弧过度;墙体内壁光洁,不积尘、易清洗、易消毒、耐腐蚀;地面使用环氧树脂自流坪或PVC卷材,材料应满足光洁、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏的基本要求。
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