BrdU染色原理

 BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于标记中新合成的DNA，可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，细胞实验外包，从而判断细胞的增殖能力。

zhu射或细胞培养后利用抗Brdu单，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu，以氢链与腺呤结合，不能直接与抗Brdu反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG孵育、




呈色，显示进入S期细胞的情况。

4.  各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分钟合适；胚胎细胞耐受性较小，不宜太快。总之在一开始时，下降速度不能超过－10℃/ 分钟。

5.  用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用 DMSO 较好，细胞增殖实验，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中很好。

6.  原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。

7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免

8. 注意自身的安全，对于来自人源性或病毒的细胞株应特别小心。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心有毒性试剂例如 DMSO，细胞迁移实验，并避免尖锐物品伤人等。

Q:如何避免中沉淀物的出现？

A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：

（1）热灭活；

（2）在 37℃ 下培养；

（3）反复冻融；

（4）γ 射线照射；

（5）长期储存在 2-8℃；

（6）在室温下放置时间过长

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，上海细胞，以  400g  离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。

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