点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测；

2、共转化：分别将诱饵/捕获质粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、阳性对照质粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、阴性对照质粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分别共转到Y2H Gold感受态细胞中，涂布于DDO平板培养；

3、点板验证：分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍，然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证；

4、实验数据与报告整理。

原位杂交（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交，使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。

       原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物

       

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精1确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交的特点是杂交在显微镜载玻片上中期染色体标本上进行。所谓原位即指标本上DNA原位变性，在利用放1射性或非放1射性标记的已知核酸探针杂交后，植物原位杂交检测服务，通过放1射自显影或非放1射性检测体系来检测染色体上特异DNA或RNA顺序，可用放1射性颗粒在某条染色体的区带出现的频率或荧光的强弱来确定探针的位置，从而进行准确的基因定位。

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