原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，荧光原位杂交，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位杂交是一项非常重要的生物技术，可以用于研究基因表达和调控，检测基因变异和染色体异常，监测细胞生长和凋亡，以及识别特定的细胞类型或组织。然而，它需要特殊的操作技术和设备，以及严格的对照实验才能获得可靠的结果。

原位杂交是一项非常重要的生物技术，可以用于研究基因表达和调控，检测基因变异和染色体异常，监测细胞生长和凋亡，以及识别特定的细胞类型或组织。然而，它需要特殊的操作技术和设备，以及严格的对照实验才能获得可靠的结果。

而是对完整的斑马鱼胚胎进行探针杂交及检测，从整体上把握探针的结合部位，然后对胚胎进行切片，以确定探针结合的具体位置。整胚原位杂交在斑马鱼分子生物学研究中是一种非常重要的实验方法，原位杂交的探针可以是同位素的探针，用自显影来检测；也可以是非同位素的探针，通过荧光或酶法予以检测。我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者，以标记探针，然后用酶联的方法进行检测。




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