荧光原位杂交技（fish）原理：是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。

       荧光原位杂交技（fish）实验步骤：

       1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。

       2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。

       3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。

       4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min，风干，DEPC水浸泡。

       5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10分钟，水稻RNA原位杂交技术服务，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

随着分子病理技术的蓬勃发展，越来越多的疾病相关分子改变被发现并逐步应用于临床实践中。自21世纪以来，分子病理诊断逐渐受到我国病理学工作者的认可和重视，并逐步在大医院病理科开展起来，特别是在遗传性疾病、感1染性疾病、肿1瘤等方面分子病理诊断已取得了长足的进步。 目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、PCR、荧光定量PCR、基因芯片和DNA测序技术。

结1核病是严重威胁人类健康的传1染性疾病，每年约有200万人死于该病，其死1亡率在传1染性疾病中仅低于艾1滋病，随着医1疗诊断技术的迅猛发展，结1核病病理诊断经历了单一形态学和联合特殊染色，到如今利用分子病理基因检测技术进行准确诊断的三个阶段。

　　我科早在全1国建立了系统性结1核病分子病理诊断技术的平台，率1先将分子病理诊断技术在结1核病中应用并推广，解决了传统病理对菌阴肺结1核及肺外结1核病的诊断率低、结1核病与非结1核分枝杆1菌病无法鉴别以及耐药结1核病无法诊断等难题。同时，我科作为中华医学会结1核病学分会金1牌病理培训基地，负责组织制定了结1核病病理诊断规范、培训了大量的专1业技术人员，为形成结1核病病理学综合诊治新模式做出了卓1越贡献!

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