除了用NTA方法,外泌体电镜服务,该团队另基于acetylcholinesterase(一种已知的外泌体表达蛋白)评估三种试剂盒提取外泌体的得率。从NTA结果看,外泌体电镜,对于血1清和血浆样本,外泌体电镜测试服务,Exo-spin的提取量高,是其他两种试剂盒的1-3倍;相对来说,脑脊髓液的提取率都比较低,ExoQuick?提取得到的外泌体浓度低。从基于acetylcholinesterase的分析结果看,其数值高于NTA方法,外泌体电镜检测,且Exo-spin得到的外泌体浓度高于其他两种试剂盒。
关于真皮层方面1. 促进成纤维细胞的增殖能力成纤维细胞是真皮层主要的细胞,在体内几乎不增殖,且随着年龄增长其数量和活性也随之下降,其功能受损及细胞外基质的改变与外源性皮肤老化密切相关。
外泌体可增强成纤维细胞的增殖能力,具有浓度依赖性,可逆转紫外线诱导的成纤维细胞老化,但对内源性老化因素所致细胞衰老作用不明显。
外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
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