武汉科锐诺生物(查看)-分子病理技术服务






原位杂交第二天

1.

1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。

3)置换2XSSCT1ml,60℃,放置15分钟。

4)置换0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。

2.

1)用MABT洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。

2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4C 冰箱过夜。



适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白;

2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。








  荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术基本原理与显色原位杂交相同,分子病理技术服务,不同之处在于FISH是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测核酸反应形成杂交体,并采用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察信号表达。为了同时检测多个靶位,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来一种新技术,即多彩色荧光原位杂交



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