原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，染色体原位杂交，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位杂交：

　　原位杂交是指用特定探针定位、检测DNA、RNA的一种有效的实验方法，通过把特点序列客隆到特殊载体上，通过转录酶反转一条天然的RNA探针，将探针和切片样品进行杂交，通过一系列显色方法，来确定RNA或者DNA表达区域；本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记，灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒，GISH/ISH/FISH按照探针进行收费，每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片，收费为1万5千元，GISH杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量大优惠！

原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。经特定标记的核苷酸链为探针，可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检DNA片段或mRNA进行杂交，然后显示标记物，从而分析待检核酸的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位，编码某种蛋白质的mRNA在胞质中的表达。




染色体原位杂交-武汉贝科新肽由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是从事“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：夏先生。