科锐诺生物科技-植物原位杂交






分子病理学是与分子生物学、细胞遗传学等学科相互渗透,在蛋白质和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、发病机制、形态变化及功能损害等方面发生和发展规律的新的分支学科,对疾病的病因、发展、发病机制及形态变化,从传统形态学概念深入至分子或基因水平,分子病理已成为肿1瘤病理研究中重要的内容和手段。①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;




菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,植物原位杂交,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。





点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;

2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey)、阳性对照质粒(pGBKT7-p53/pGADT7-T)、阴性对照质粒(pGBKT7-Lam/pGADT7-T)分别共转到Y2H Gold感受态细胞中,涂布于DDO平板培养;

3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证;

4、实验数据与报告整理。





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