湖北植物启动子筛选-武汉贝科新肽(图)
用水稻原生质体进行亚细胞定位时,为什么不拍摄叶绿体的自发荧光?
经测验,使用水稻黄化苗制备原生质体,载体转化效率及基因表达强度较高,植物启动子筛选,而黄化苗中叶绿体较少,因此水稻原生质体定位拍照时,除非与叶绿体共定位,否则不拍摄叶绿体的自发荧光。
为什么要提供GFP空载的对照图片?
(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
蛋白质亚细胞定位的研究方法
1、融合报告基因定位法
将绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)等报告基因,与目标蛋白基因融合在一起,由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位,对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察,从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。
2、荧光标记定位法
将反应与化学光学信号相结合,通过特异性的荧光标记与目标蛋白(抗原)结合,通过荧光信号检测,确定目标蛋白的亚细胞位置。目前标记信号不局限于荧光素,还有同位素、酶、胶体金颗粒、纳米金属颗粒等。
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