点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测；

2、共转化：分别将诱饵/捕获质粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、阳性对照质粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、阴性对照质粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分别共转到Y2H Gold感受态细胞中，涂布于DDO平板培养；

3、点板验证：分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍，然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证；

4、实验数据与报告整理。

分子病理应用的检测样本主要包括石蜡组织、新鲜组织、脱落细胞、全血及其他体液等。石蜡切片标本厚度应在4-6μm，切片数量依据组织大小而定。样本质量对检测结果和分析至关重要，分子病理技术服务，病理医师需要对可评估的样本进一步明确病理诊断，并评价标本有无出血、坏死和不利于核酸检测的前处理(例如含HCl脱钙液处理)，病变细胞(如细胞)的总量和比例，避免假阴性。进行NGS检测前需通过病理诊断明确其的性质及含量，根据不同类型选择合适的基因panel测序。组织标本中细胞含量建议达到20%以上，低于此标准可富集后检测。未经病理评估的基因检测结果不可单独用于分子病理临床诊断目的。

菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。

（6） 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。

分子病理技术服务-武汉科锐诺(图)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。“外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务”选择武汉科锐诺生物科技有限公司，公司位于：湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼，多年来，科锐诺坚持为客户提供好的服务，联系人：王经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。科锐诺期待成为您的长期合作伙伴！