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外泌体分离提取方案。主要方案包括:

1、差速超1速离心法;

适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;

2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;

适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;

3、超滤提取法;

适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。


外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。







外泌体作为药1物载体,胞胞外囊泡zetaview检测,实现靶1向给药。外泌体具有负载“货物“并将其传递给靶1细胞的能力,可用于细胞间通讯,尤其是远距离通讯。以外泌体作为药1物转运载体,具有免1疫源性低、运输效1率高、稳定性好和靶1向性强以及能跨越血脑屏障等优势。外泌体也适合递送各种化学物质、蛋白质、核酸等。Buller B等将负载miR-146的外泌体注射至患有角质细胞瘤小鼠的肿1瘤部位,发现miR-NAs有效的抑制了肿1瘤的生长。  



外泌体的生物学功能:1、首1次报道的外泌体生物功能是红血球成熟过程中排出来的蛋白质。

2、进一步的研究表明其功能包括排泄不必要的蛋白质和RNA等物质。

3、可促进生物体免1疫应答反应。

4、对凝血和血管生成其促进作用。

5、可通过化学信号参与癌细胞的转移。

6、在哺乳期的免1疫调节过程中起到重要的作用。

7、不仅参与触发下游信号传导,而且特异性靶向受体细胞和交换蛋白。

8、可提供特殊的核酸且起到运输功能。

9、作为细胞-细胞之间传递信息的重要分子。

10、在病毒和朊蛋白等多种病原体之间起着独1特的作用。





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