和其它实验方法一样，必须同时设对照试验以证明其实验结果特异性。对照试验的设置须根据核酸探针和靶核苷酸的种类和现有的可能条件去选定。ISHH的优点是它的高度特异性，它可测定组织、培养的单个细胞或细胞提取物中的核苷酸含量。应用高敏感度的性标记cRNA探针在理想的ISHH的实验条件下检测mRNA，其敏感度可达到20个mRNA拷贝/每个细胞。由于双链DNA的稳定性，在用ISHH定位DNA时很少发生丢失，降解，其敏感性高到能够显示在染色体铺片上，有时甚至在组织切片上的单个基因拷贝。正因为如此，对ISHH结果的解释应持慎重态度，特别是前人未报告过的新发现。

原位杂交技术在许多领域都有应用，以下是其中几个具体应用：

细胞生物学和发育生物学：在细胞生物学和发育生物学领域，原位杂交技术常被用于研究基因的表达和定位。例如，通过标记特定基因的探针，可以在细胞或组织中检测特定基因序列的存在和分布，进而了解基因在细胞分化、发育和功能中的作用。

基因组学和遗传学研究：原位杂交技术也可用于基因组学和遗传学研究。例如，通过标记多个基因探针，原位杂交，可以检测基因组中的多个基因序列，从而进行基因定位、基因表达谱分析、基因突变检测等研究。

病毒学和病原微生物研究：在病毒学和病原微生物学领域，原位杂交试剂，原位杂交技术常被用于检测和定位病毒、细菌等病原微生物。例如，通过标记特异性或核酸探针，可以检测组织中病原微生物的存在、情况以及分布特征，从而为疾病的预防、诊断和提供依据。

总之，原位杂交技术在生物学、医学、基因组学、遗传学、病毒学和病原微生物学等领域都有广泛的应用价值，为人类认识生命现象、探究疾病机制和提供了有力的技术支持。

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2） 置换成30％的PBST溶液，放置5分钟

3） 置换成PBST溶液，GISH，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟

5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

 蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，ISH，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

贝科新肽科技公司(图)-GISH-原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是湖北 武汉 ,化学试剂的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在贝科新肽领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创贝科新肽更加美好的未来。