染色体原位杂交-武汉贝科新肽科技公司(图)







植物原位杂交在遗传育种方面的应用主要包括:

异源染色质及多种染色体畸变检测:通过远缘杂交把有用遗传物质基因的异源染色质渐渗到植物中。如带有几种抗病基因的黑麦1R染色体已被整合到许多高产的小麦品种中。原位杂交技术则是鉴定外源染色体(质)的有效手段。

基因组印记研究:基因组印记是指一个基因的两条染色体上的DNA序列存在差异。通过植物原位杂交技术,可以检测到基因组印记的存在和分布,从而帮助确定基因组的进化、遗传和功能特征。




同一样本可以多次做原位杂交实验吗?

一般情况下,如果操作没有得到理想的结果,是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针,还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本,处理方法略有不同。

原位杂交实操中哪些因素比较重要?

重要的因素:温度、光照、湿度和试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响着荧光染料的强度,所以探针要避光保存,其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存;各种试剂pH也要达到要求,这也直接关系到原位杂交的稳定性。




菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,染色体原位杂交,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。




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