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分子病理检测的意义

   精1准医学时代的分子l靶向基因检测

  精1准医学概念的提出使各医学学科在诊疗方式、治1疗手段上都发生着翻天覆地的变化,但精1准的治1疗首先必须依托于精1准的诊断,基因状态检测则是精1准诊断的#步。基因检测可以诊断疾病,也可以用于疾病风险的预测及指导肿1瘤靶向药1物治1疗。基因检测是通过组织、血液、体液或细胞对DNA进行检测的技术,取被检测者组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测,预知身体患疾病的风险,分析它所含有的各种基因情况,从而使人们能了解自己的基因信息。



菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。






荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交,通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,植物原位杂交测试服务,或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。

       荧光原位杂交技(fish)实验步骤:

       1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

       2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。

       3、切片:石蜡经切片机切片,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。

       4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min,风干,DEPC水浸泡。

       5、消化:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。







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