除了洋葱亚细胞定位,还有许多其他亚细胞定位方法。其中,比较常见的有:
荧光法:将学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。用荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等也称为荧光细胞(或组织)化学技术。
GFP融合蛋白表达法:将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合,启动子筛选,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。
亚细胞结构分离定位法。
为什么不先对一个基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?
不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮?
不同物种的细胞可能对基因表达有影响,当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时,可以考虑换一种受体材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生质体中无法观察到荧光,此时可以考虑注射叶片来观察荧光。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
1. 叶绿体
叶绿体是植物细胞中重要的细胞器之一,它们负责进行光合作用,将光能转化为化学能。为了定位叶绿体,我们可以使用一种名为荧光素的化合物来标记它们。荧光素可以被叶绿体中的叶绿素吸收,从而发出绿色荧光。在洋葱细胞中,叶绿体通常位于细胞的边缘或周围。
2. 线粒体
线粒体是细胞中的另一个重要细胞器,它们负责产生细胞所需的能量。为了定位线粒体,我们可以使用一种名为MitoTracker的化合物来标记它们。MitoTracker可以穿过细胞膜并进入线粒体,从而发出红色荧光。在洋葱细胞中,线粒体通常位于细胞的中央或周围。
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