原位杂交是一种强大的技术，它使研究人员能够在细胞或组织中确定特定DNA或RNA序列的位置。这项技术在基础研究和临床应用中都有广泛的应用。通过了解原位杂交的基本原理和实验步骤，研究人员可以更好地理解其功能并应用于他们的研究中。

原位杂交技术的定义和基本原理原位杂交技术是一种基于核酸分子杂交原理，将标记的核酸探针与生物组织或细胞中的DNA或RNA进行特异性结合，从而在细胞水平上检测目标核酸序列分布的技术。原位杂交技术的基本原理是利用DNA或RNA的互补性，通过加热或化学反应使探针与组织或细胞中的目标核酸序列形成双链复合物，进而实现目标核酸序列的定位。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结合，杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料.FISH的基本原理是将DNA（或RNA）探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示中期分裂相，还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，染色体原位杂交，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

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