科锐诺(多图)-擅长染色体原位杂交的公司
阻断内源性过氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室温避光孵育15min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
预杂交:滴加预杂交液,37°C孵育1h。
杂交:倾去预杂交液,滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6 probe 杂交液,浓度6ng/ul,恒温箱37度杂交过夜。
杂交后洗涤:洗去杂交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,擅长染色体原位杂交的公司,37°C洗2×5min,0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加甲酰胺洗涤。
滴加封闭液:滴加封闭血1清(正常兔血1清),室温30min。
滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶(anti-DIG-HRP):倾去封闭液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。
荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术基本原理与显色原位杂交相同,不同之处在于FISH是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测核酸反应形成杂交体,并采用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察信号表达。为了同时检测多个靶位,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来一种新技术,即多彩色荧光原位杂交
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