预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，染色体原位杂交，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解细菌，湖北原位杂交，按本段下面所述方法，原位杂交检测，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

植物组织原位杂交是一种重要的分子生物学技术，它可以用来研究植物基因的表达和调控。该技术利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合，从而确定目标基因的表达模式和位置。本文将介绍植物组织原位杂交的原理、步骤和应用。

原理

植物组织原位杂交的原理是利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合，荧光原位杂交，从而确定目标基因的表达模式和位置。DNA探针是一段已知序列的DNA分子，可以与目标RNA或DNA的互补序列结合。在组织原位杂交中，DNA探针通常标记有荧光染料或性同位素，以便于检测。

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