铁死亡(Ferroptosis)早由哥伦比亚大学Dr. Brent R.Stockwell在2012年提出,外泌体测序测试服务,是一种铁依赖性的,区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的的本质是谷1胱1甘1肽的耗竭,谷1胱1甘1肽过氧化物酶(GPX4)活性降低,
脂质氧化物不能通过GPX4催化的谷1胱甘肽还原酶反应代谢,之后二价的铁离子氧化脂质产生活性氧,从而促使铁死亡的发生。
抑制基质金属蛋白酶(MMPs)
MMPs主要负责细胞外基质的降解,尤其是构成真皮结构的胶原纤维与弹力纤维,故MMPs是调节皮肤光老化的主要靶标之一。
外泌体对MMPs的调节能减少真皮层弹性和胶原纤维的损伤,改善真皮层老化。
通过减少氧化应激来延缓皮肤衰老
紫外线辐射可产生大量ROS(即活性氧),影响真皮成纤维细胞功能,诱导MMPs合成,损伤细胞外基质成分(如胶原蛋白、弹力蛋白等)。衰老成纤维细胞较正常细胞可产生更多ROS。
外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
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