为什么有的基因定位结果与预想的不一致？

对于一个特定的定位载体，只要荧光表达较好，其定位结果是确定的，不会随人为意愿或操作而改变。至于有时候和预想的结果不一样，可能和蛋白本身、选择的表达载体以及荧光蛋白融合方式等有关。

为什么有的普通定位结果出来后无法准确判断其定位位置？

细胞中的细胞器复杂且多样，除一些常见的、特征比较明显的细胞器外，有些细胞器在激光共聚焦下形状比较相似，例如：线粒体、过氧化物酶体、高尔基体等细胞器，它们的荧光表达形状可能都是点状，BIFC，因此不易区分。这时可以结合基因的其他功能研究来判断其可能表达的位置。另外，蛋白表达本身也是一个复杂的过程，涉及到多个合成场所及转运过程，自身表达情况可能比较复杂，因此不易判断具体的表达位置。

在当今生物科技飞速发展的时代，亚细胞定位公司以其的定位技术，在细胞生物学、研发和疾病等领域展现出了巨大的潜力。这家公司的创新性研究和技术应用，使得我们能够更深入地了解细胞结构和功能，为未来的生物科技领域开辟了新的道路。

亚细胞定位公司的技术突破

亚细胞定位公司开发的定位技术，能够地确定蛋白质和其他分子在细胞内的位置。这项技术对于理解细胞内部运行机制和疾病发生机理具有重要意义。通过这种技术，科学家们可以地揭示细胞内部的奥秘，为研发和疾病提供新的思路。

亚细胞定位操作步骤

1、通过一些在线网站预测亚细胞定位

2、亚细胞定位载体构建

（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。

（2）载体构建：将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。

3、细胞转染

当细胞生长到对数生长期时，接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。

4、激光扫描共聚焦显微镜观察

将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦显微镜观察，采取图像。

BIFC-贝科新肽(在线咨询)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司实力不俗，信誉可靠，在湖北 武汉 的化学试剂等行业积累了大批忠诚的客户。贝科新肽带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌，共创美好未来！