原位末端凋亡检测（Tunel）

实验原理： TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色，茎原位杂交技术服务，能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如，生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-OH末端，再用组化法或荧光检测凋亡细胞。

阻断内源性过氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6 probe 杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。

杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。

滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶（anti-DIG-HRP）：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。

        

原位杂交第三天

1） 用1ml含10%热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

武汉科锐诺(多图)-茎原位杂交技术服务由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺(多图)-茎原位杂交技术服务是武汉科锐诺生物科技有限公司今年新升级推出的，以上图片仅供参考，请您拨打本页面或图片上的联系电话，索取联系人：王经理。