BioSys ELISPOT reader（ELISPOT）的原理是什么呢
（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
（二）ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，BioSys ELISPOT reader厂家，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。
ELISPOT分析仪
●专Li立体3D双光照明系统：
● 彩色成像及分析系统：
●高精度X－Y定位载板台：
● 通用性强：
● 自动聚焦：
●高灵敏性，高特异性的优点：
●动态“像素周围识别”，BioSys ELISPOT reader，模糊、弥散、过大、过小斑点以及高背景或不规则背景均可检测。
●高分辨率：
●边沿识别系统：
●光密度值测定：
●特有的WASH OUT背景补偿功能
●测量结果可信：
●用户自定义参数和再分析：
●“One－Click”测量区域选择：
直观的板孔选择界面，可轻松进行单孔、任意孔区域、全板扫描。
●智控分析方式：
●数据分析：
●直接输出模式：
●检测快速：
●欧盟CE认证、符合21 CFR PART 11认证要求
●软件方面
预设试验分析模式、方便使用；分析参数开放、人机互动更加可靠
●历史悠久，产品成熟度高、文献量大：
30多年历史验证，1500多个实验室成功使用，国内有50多的单位成功使用，无技术和应用风险。
BioSys ELISPOT reader原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后，被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，BioSys ELISPOT reader供应商，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有（或不含）刺激物中培养；
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被Antibody捕获；
3. 移出细胞，清洗板子，加入生物素标记的检测Antibody，形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构；
4. 为了观察膜上斑点的形成，加入酶标记的亲和素；
5. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；
6. 斑点计数（可用bioreader自动读板仪计数），数据处理，结果分析。
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