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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，自贡玻璃水亮蓝，例如测定抗ti，可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。

4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。

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　亮蓝毒理学依据

　　1．LD50 大鼠口服大于2g/kg体重。

　　2．ADI 0~12.5mg/kg体重（FAO/WHO，1994）

　　使用 着色剂。

　　1．使用注意事项 参见苋菜红。

　　2．使用范围及使用量 我国《食用添加剂使用卫生标准》（GB 2760-1996）规定：可用于高糖果汁（味）、果汁（味）饮料、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装；染色樱桃罐头（系装饰用，不宜食用）。用于青梅、虾（味）片，da使用量0.025g/kg；用于冰淇淋，da使用量0.022g/kg；用于红绿丝，da使用量0.1g/kg。

亮蓝为有金属质感的浅紫色至古铜色颗粒物或粉末状，无臭。溶于于水，玻璃水亮蓝批发，溶液呈亮蓝色；可溶精、丙二醇和凡士林。耐光性性、耐温性、耐碱性、耐盐性和耐微生物性非常好，耐酸性和耐氧化还原反应特点。弱酸性时呈青色，强碱时呈黄色，在烧开溶液中呈蓝紫色。亮蓝的饱和度极强，玻璃水亮蓝厂家，一般全是与别的服用添加剂相互配合应用，使用量小，在0.0005%~0.01%中间。装饰艺术蔬菜水果、可可制品、巧克力朱古力制品(包含可可脂朱古力及制品）及其糖块（05.01.01可可制品、05.04装饰设计糖块、顶饰和甜汁以外）、点心上彩装。客户在应用本产品前要认真阅读GB2760《食用添加剂应用质量标准》，每个纯色种类的应用范畴和使用量会大不一样。

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