原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-原位杂交检测







原位杂交第二天

1.

1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。

3)置换2XSSCT1ml,60℃,染色体荧光原位杂交,放置15分钟。

4)置换0.2XSSCT1ml,60℃,原位杂交,放置30分钟,重复一次。

2.

1)用MABT洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。

2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4C 冰箱过夜。






而是对完整的斑马鱼胚胎进行探针杂交及检测,从整体上把握探针的结合部位,然后对胚胎进行切片,以确定探针结合的具体位置。整胚原位杂交在斑马鱼分子生物学研究中是一种非常重要的实验方法,原位杂交的探针可以是同位素的探针,用自显影来检测;也可以是非同位素的探针,染色体原位杂交,通过荧光或酶法予以检测。我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者,以标记探针,原位杂交检测,然后用酶联的方法进行检测。




原位杂交技术(in situhybridization)是以标记的核酸分子为探针,在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

可以检测cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各种种属的标本,包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。




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