而是对完整的斑马鱼胚胎进行探针杂交及检测，从整体上把握探针的结合部位，染色体原位杂交，然后对胚胎进行切片，以确定探针结合的具体位置。整胚原位杂交在斑马鱼分子生物学研究中是一种非常重要的实验方法，原位杂交的探针可以是同位素的探针，用自显影来检测；也可以是非同位素的探针，通过荧光或酶法予以检测。我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者，原位杂交，以标记探针，原位杂交检测，然后用酶联的方法进行检测。

荧光原位杂交（FISH）技术具有以下优点：

可多重染色：利用不同的荧光染料标记不同的探针，可以实现多重荧光原位杂交，从而同时检测多个序列，提高实验效率了。

高度创新性和性：FISH技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位，还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究，植物原位杂交，在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

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