后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

  原位杂交的预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

   杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

        

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

原位杂交的应用范围：

①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，植物基因组原位杂交技术服务，基因表达和基因组进化的研究；

②感1染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳1头状瘤1病毒和巨细胞病毒DNA的检测；

③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

④基因在染色体上的定位；

⑤检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；

⑥分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。

植物基因组原位杂交技术服务-科锐诺(推荐商家)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司位于湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前科锐诺在技术合作中享有良好的声誉。科锐诺取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。科锐诺全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。