山东富舜新材料科技有限公司座落在美丽的“泉城”济南。公司是集化学科研、开发、生产、销售、服务为一体的综合型企业。我公司拥有的生产设备,完善的产品检测手段和体系。我公司的员工具有较强的责任感。经过多年的发展,现已形成添加剂、阻燃剂、和化工助剂三大类上百个品种。公司本着“诚信经营、专注品质”的宗旨,参与到激烈的市场竞争中来,以好的产品质量,优惠的产品价格,令人满意的销售服务,赢得大家的支持与信赖。山东富舜新材料科技有限公司的诚信、实力和产品质量获得业界的认可。欢迎各界朋友莅临参观、指导和业务洽谈。
考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点
蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲ji橙、考马斯亮蓝、xiu甲fen绿和xiu jia酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。
考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色,且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈da光吸收,至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速,消耗样品量少,但不同蛋白质之间差异大,洗手液亮蓝供应商,且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、bing酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强,比色杯不洗干净会影响光吸收值,保定洗手液亮蓝,不可用石英怀测定
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?本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie?Blue?Staining?Kit)采用了经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。?
???使用本试剂盒,采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带;采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。观察到清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。?
???本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的jia醇,但含有刺激性气味的yi酸。
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考马斯亮蓝染色?使用说明:
? 1.?常规染色脱色方法:
? a.?电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
?b.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。? 注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,洗手液亮蓝价格,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对终的染色效果产生fu面影响。?
c.?倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。? 注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
? f.?完成脱色后,可以把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保? 存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。?
2.?快速染色脱色方法:?
a.?电泳结束后,取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
?b.?随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动5-10分钟。
? c.?倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
? d.?加入适量考马斯亮蓝染色脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
? e.?微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
? f.?随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
? g.?更换新鲜的脱色液,重复步骤e和步骤f,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋白条带染色效果达到预期。?
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