玉米原位杂交技术服务-武汉科锐诺生物(图)






首先,分子病理诊断为的诊断及鉴别诊断提供了依据,当遇到少见疑难或罕见病例时,玉米原位杂交技术服务,尤其是通过形态学和免yi组化染色仍不能确定的类型,这时候就需要借助分子病理技术,从基因水平来判断疾病的异常情况,协助病理医生作出相对准确的诊断并判断该疾病的预后及转归。应用领域广泛的要数软组织和骨、淋巴造血系统,因为这些系统的相似而不同,单靠镜下表现和已知的已无法满足诊断需求。另外,分子病理检测也常常运用在分子分型中,比如大家熟知的分子分型,通过基因表达谱研究,可将分为管腔A型、B型,HER-2阳性型,基底样型。



原位杂交杂交液注意事项:

       (1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等。

       (2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。甲酰胺可使Tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。

       在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。





原理

原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。

经特定标记的核苷酸链为探针,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检DNA片段或mRNA进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检核酸的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mRNA在胞质中的表达。





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