外泌体NTA服务-科锐诺(在线咨询)
铁死亡(Ferroptosis)早由哥伦比亚大学Dr. Brent R.Stockwell在2012年提出,是一种铁依赖性的,外泌体NTA服务,区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的的本质是谷1胱1甘1肽的耗竭,谷1胱1甘1肽过氧化物酶(GPX4)活性降低,
脂质氧化物不能通过GPX4催化的谷1胱甘肽还原酶反应代谢,之后二价的铁离子氧化脂质产生活性氧,从而促使铁死亡的发生。
外泌体作为活1细胞分泌的含有RNA 和蛋白质的微囊泡,直径为 30-150nm之间,广泛分布于外周血、尿液、唾液、腹1水、羊水等多种体液中。研究表明,外泌体包含多种活性分子,如蛋白质、脂肪和核酸(mRNA、miRNA 及其它非编码RNA ) 等, 能作为信号分子传递给靶1细胞,介导细胞间的物质传递与信息交流,文献报道体液中外泌体 RNA (特别是miRNA 等非编码RNA)在不同的疾病模型中存在明显的表达差异。同时,这些分子被外泌体的脂膜所包裹和保护, 能保持其原有稳定性和生物学功能, 已经成为液体活检的重要分子标志物。近年来, 外泌体已成为科研热点,其在临床上巨大的应用价值, 引起了众多研究者以及商业人士的浓厚兴趣。随着相关技术的发展, 有关外泌体在临床疾病(尤其是肿1瘤)的早期诊断、治1疗、预后及伴随诊断的应用研究正在蓬勃开展。通过高通量技术对外泌体 RNA进行测序, 可快速高1效获得外泌体RNA 的全1面信息,是疾病诊断和随访的理想手段。
外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
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