染色体荧光原位杂交-原位杂交-武汉贝科新肽(查看)







原位杂交是一项非常重要的生物技术,染色体荧光原位杂交,可以用于研究基因表达和调控,检测基因变异和染色体异常,监测细胞生长和凋亡,以及识别特定的细胞类型或组织。然而,它需要特殊的操作技术和设备,以及严格的对照实验才能获得可靠的结果。




原位杂交是一项非常重要的生物技术,可以用于研究基因表达和调控,检测基因变异和染色体异常,监测细胞生长和凋亡,原位杂交,以及识别特定的细胞类型或组织。然而,它需要特殊的操作技术和设备,染色体原位杂交,以及严格的对照实验才能获得可靠的结果。


菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,植物原位杂交,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。




 组织原位杂交(Tissue in situ hybridization),即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

  原位杂交技术的基本原理

  利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。

  1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA双键分子

  2.应用带有标记的(有性同位素,如3H、35S、32P,荧光素、生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交

  3.用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位

  用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

  此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。




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