为什么要提供GFP空载的对照图片？

（1）作为整个实验过程中的操作参照，可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

（2）作为载体体系的参照，确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

拍摄时为什么有明场通道？

（1）显示细胞状态，有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态，变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

（2）显示荧光确实是细胞内蛋白表达的，而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。

为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？

在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，双分子荧光互补技术，因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。

在分析蛋白亚细胞定位时，需要考虑多种因素，如蛋白质的结构、序列、修饰等。不同的蛋白质在细胞内的位置可能不同，例如有些蛋白质可能定位于细胞质、细胞核、线粒体、叶绿体等不同部位。同时，同一个蛋白质在不同细胞类型或不同生理状态下也可能有不同的亚细胞定位。因此，在进行蛋白亚细胞定位分析时，需要考虑多种因素的综合影响。

蛋白亚细胞定位的研究成果对于了解细胞的生命活动和调控机制具有重要意义，也为疾病诊断和提供了重要的参考依据。因此，开展蛋白亚细胞定位分析和预测服务，对于生物学、医学、生物信息学等领域的发展都具有重要的意义。

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