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外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
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透射电镜作为鉴定外泌体的金标准,一直是科锐诺生物主营的业务之一。透射电镜点分辨率可以达到0.1nm,非常适合用来观察外泌体类囊泡。客户只需要寄送新鲜或者冻存的外泌体样品,我们负责从制片到观察的全套检测服务。一个样品提供2个放大倍数,10-15张照片。检测周期为7个工作日。
在透射电镜基础上,用外泌体标记蛋白对外泌体进行免1疫标记,组织外泌体提取检测,利用胶体金标记出外泌体表面的特定抗原的位置。结合透射电镜形态学定性的特点,同时确定外泌体标记蛋白的位置。这样同时从形态学及免1疫学原理上验证外泌体。这样数据结果中既可以获得经典形态的外泌体,又可以定性及定位外泌体表面的标志蛋白。这样具有更充分的说服力。
细胞囊泡分泌的外泌体保留了天然外泌体的形态和结构特征,其靶向性和个性化能力优于天然外泌体。进化后的外泌体表面携带更多的蛋白质因子,具有更强的靶向识别功能。其次,外泌物擅长智能修复,能迅速覆盖问题皮肤,激1活自体细胞的修复能力。同时,阅读细胞记忆和基因记忆,智能调节各种细胞的再生和更新,刺激现有细胞的生长和功能,重塑活跃的皮肤循环生态。
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