用水稻原生质体进行亚细胞定位时，洋葱亚细胞定位，为什么不拍摄叶绿体的自发荧光？

经测验，使用水稻黄化苗制备原生质体，载体转化效率及基因表达强度较高，而黄化苗中叶绿体较少，因此水稻原生质体定位拍照时，植物亚细胞定位，除非与叶绿体共定位，否则不拍摄叶绿体的自发荧光。

为什么要提供GFP空载的对照图片？

（1）作为整个实验过程中的操作参照，可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

（2）作为载体体系的参照，确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

蛋白质亚细胞定位的研究方法

1、融合报告基因定位法

将绿色荧光蛋白（GFP）及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）等报告基因，与目标蛋白基因融合在一起，由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位，对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察，从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。

2、荧光标记定位法

将反应与化学光学信号相结合，通过特异性的荧光标记与目标蛋白（抗原）结合，通过荧光信号检测，确定目标蛋白的亚细胞位置。目前标记信号不局限于荧光素，还有同位素、酶、胶体金颗粒、纳米金属颗粒等。

亚细胞定位常见问题 细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位，是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序，洋葱亚细胞定位方法，根据功能和空间分布的不同，细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，即亚细胞，湖北亚细胞定位，其结构只能通过电子显微镜才能观察。常见亚细胞有细胞核、细胞膜、内质网、高尔基体、细胞质、线粒体、叶绿体等。每种亚细胞中都存在一组特定的蛋白质，亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。蛋白质在细胞质中经过翻译并合成，由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞中以参与细胞的各种生命活动，这一过程就称为蛋白质的亚细胞定位。



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