原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，原位杂交，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，原位杂交检测，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，染色体原位杂交，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用，例如：

动物行为学研究：在动物行为学中，染色体荧光原位杂交，原位杂交技术可以用于检测动物行为与基因表达之间的关系。例如，通过比较不同行为状态下动物脑组织中基因表达的差异，可以揭示特定基因对动物行为的影响。

生物技术应用：原位杂交技术在生物技术领域也有广泛应用，例如在基因、基因编辑和开发等方面。例如，通过原位杂交技术可以定位和特定基因，为基因和基因编辑提供基础数据和工具。

这一原理对于检测一个特异的mRNA在某一种生物体，或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期，由于核酸分子杂交的特异性高，并可定位，因此该技术已被广泛应用，例如与细胞内RNA进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便；同时由于原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。




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