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包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。
6.切片:切片前先将蜡块切面在冻台上冷冻几分钟,将所要切的包埋块固定在标本台上,使包埋块外切面与标本夹截面平行,并让包埋块稍露出一截。将刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋,上好刀片,使切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角,包埋块上下边与刀口平行。
在微动装置上调节切片要求的厚度(一般为4微米),调节时应注意指针不可在两个刻度之间,否则容易损伤切片机,将刀台移至近标本台处,让刀口与组织切面稍稍接触,这时就可以开始切片了。
常见的生物切片,厚度一般在几微米的程度,这种厚度制作起来比较简单,除了可以使用自动化的设备来切片之外,手动操作也能切到这种厚度,而且完够满足光学显微镜下观察的标准。不过在前沿的科研领域里,需要观察更细微的细胞结构,甚至需要从分子的层面来进行研究,这时候就需要用到电子显微镜。然而电子显微镜也需要更薄的样品,切片至少要达到0.1微米的厚度,而这种切片也就被称为是超薄切片,在很多实验研究里需要厚度达到50纳米,显然手I操作是无法达到这种厚度的。那么在实验环境下是怎样做成这种超薄生物切片的呢?首先是需要进行更好的固定,因为在如此薄的尺度之下,不但基本的细胞结构都已经被完全破坏,线粒体三维重构检测技术服务,而且其中的细胞器也都被切开,里面的生物酶会释放出来,并且在很短的时间内使细胞结构遭到破坏。所以就需要在取得样品之后尽快进行固定,要求在一-分钟之 内完成这项操作,然后再使用对应的材料来做透明化以及包埋,接下来还需要配合的切片机来完成切片的过程,从而达到理想的厚度。
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病理切片的制作步骤注意事项:
大小标本必须分开处理,大标本固定时间不得少于6小时;小标本不得少于3小时。
固定液必须及时更换,固定后必须流水冲洗。根据切片量化的控制,专人负责更换药剂,以保证每一批切片的质量恒定。
固定、脱水温度不得高于37℃。
包埋用石蜡必须过滤。
试剂必须及时更换。
切片刀必须锋利,用力均匀,切片厚度3—5微米。切片完整无污染,无皱褶。
胃镜、穿刺等小活检组织切片必须作连续性切片,数量不得少于8张。
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