原位杂交（In Situ Hybridization）是指将特定标记的已知核酸序列为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸序列进行定量定位的过程。这个技术可以用于研究细胞或组织中特定基因或DNA序列的表达和定位，从而帮助研究者深入理解和探究生物学过程。原位杂交有几种不同的类型，包括荧光原位杂交和其他用于基因表达分析的方法。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，荧光原位杂交，避免振荡。

2）用等体积的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

杂交

1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。

 注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

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