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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下,洗手液亮蓝生产厂家,考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合,测量在595 nm处的吸收值,在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下,蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,da光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,xaio可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,洗手液亮蓝批发,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
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相对分子质量792.86。亮蓝为服用深蓝色色素,归属于人造色素,是由邻磺酸与N--N-(3-磺基苄基)-经缩合反应、空气氧化而制取的。归属于甲酰胺类物质。可在食品类、、护肤品等制造行业中作添加剂用。食品企业中适用点心、糖块、饮品等的上色。亮蓝特性:亮蓝为有金属质感的浅紫色至古铜色颗粒物或粉末状,无臭。溶于于水,溶液呈亮蓝色;可溶精、丙二醇和凡士林。耐光性性、耐温性、耐碱性、耐盐性和耐微生物性非常好,松原洗手液亮蓝,耐酸性和耐氧化还原反应特性。弱酸性时呈青色,强碱时呈黄色,在烧开溶液中呈蓝紫色
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