柠檬酸的发酵因、工艺、原料而异，但在发酵过程中还需要掌握一定的温度、通风量及pH值等条件。一般认为，黑曲霉适合在28～30℃时产酸。温度过高会导致菌体大量繁殖，糖被大量消耗以致产酸降低，同时还生成较多的草酸和葡萄糖酸；温度过低则发酵时间延长。微生物生成柠檬酸要求低pH，适pH为2～4，这不仅有利于生成柠檬酸，减少草酸等杂酸的形成，同时可避免杂菌的污染。

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结晶紫指示液

取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，延吉柠檬酸，即得。

操作步骤：精密称取供试品约0.5g，置锥形瓶中，柠檬酸销售，加冰醋酸15mL溶解后，加结晶紫指示液1滴，用滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显绿色，并将滴定结果用空白试验校正。记录消耗滴定液的体积数（mL），每1mL定液（0.1mol/L）相当于52.86mg的C22H28N2O·C6H8O7。

　由于制备柠檬酸钠的原料基本来源于粮食，因而，对人类健康不会产生危害。联合国粮农与世界卫生组织对其每日摄人量不作任何限制，柠檬酸专卖，可认为该品属于无害品。不过，枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物，钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中钙离子减少，而使血液凝固受阻。在临床上采取新鲜血液时，柠檬酸钠就作为剂。

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