亚细胞定位的重要性：

确定蛋白质功能：蛋白质的功能与其所处的亚细胞位置密切相关。例如，双分子荧光互补技术，位于细胞核中的蛋白质可能参与基因调控，而在细胞质中的蛋白质可能参与代谢过程。通过确定蛋白质的亚细胞定位，可以为其功能研究提供重要线索。

揭示分子交互机理：不同亚细胞位置的蛋白质之间可能存在相互作用，这些相互作用对于细胞的正常生理功能至关重要。了解蛋白质的亚细胞定位有助于揭示这些分子交互机理。

直接法

将标记的特异性荧光，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光，室温下干燥后封片、镜检。

间接法

如检查未知抗原，先用已知未标记的特异（）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的，再用标记的抗（第二）与抗原标本反应，使之形成—抗原—复合物，再用水洗去未反应的标记，干燥、封片后镜检。如果检查未知，则表明抗原标本是已知的，待检为，其它步骤的抗原检查相同。

构建亚细胞定位载体时，GFP融合位置为什么有N端、C端之分？

若序列中存在信号肽，则构建载体时需避开这一端来融合荧光蛋白。需注意不同的融合方式可能会得到不同的定位结果，例如融合在荧光蛋白N端的目标蛋白一般无法得到过氧化物酶体的定位结果；融合在荧光蛋白C端的目标蛋白一般无法得到线粒体、质体的定位结果。

为什么不同的受体材料有时得到的定位结果不一样？

不同物种的细胞在翻译表达基因时，其表达模式和影响因子不同。受物种差异的影响，同一个载体在不同的受体材料中表达的位置可能不同，因此建议实验时尽可能选用与目的基因来源相近的受体材料进行表达。

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