酶联斑点分析实验步骤与原理示意 （示意图如下）

大致原理上分为如下7个步骤，详情已具体产品说明书为准

Step.1 包被：将单clone捕获Antibody添加到乙醇处理的PVDF膜板上

Step.2 细胞孵育：在有刺激的情况下加入细胞，孵育，酶联斑点分析哪家好，细胞分泌细胞因子

Step.3 捕获分泌物：activation后的细胞，分泌的细胞因子被周围的Antibody结合捕获

Step.4 检测Antibody：去除细胞，酶联斑点分析报价，清洗平板，加入生物素化的检测Antibody

Step.5 链霉亲和素-酶偶联物：加入链霉亲和素偶联物，保证后续在膜上形成斑点

Step.6 加反应底物：当酶催化时，显色底物形成不溶性沉淀

Step.7 结果分析：在自动点阅读器中对结果进行分析。每个斑点对应一个分析物分泌细胞

德国bioreader酶联斑点分析

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★ 顶部和底部双LED 长效光源；

★ 适用于双LED 光源的3D 光路系统；

★ 摄像镜头，5MCCD；

可针对分析96 微孔板双色酶联斑点检测；

前置进板方式，方便取放ELISPOT板；

自动斑点大小识别技术（Auto-Size），辅助真实斑点自动计数；

★ 自动边缘识别技术（Auto-Border），确保识别全孔斑点；

★局部斑点3D 放大技术；

★ 斑点光密度值分析和3D 细胞印子分泌峰技术，可形成斑点细胞印子分

泌量相对定量输出；

★ 亚像素（Sub-Pixel）技术，增强斑点图像识别清晰度；

2.3.7 融合斑点自动分离识别技术和纤维去除技术；

2.3.8 图像自动居中、自动暴光、自动白平衡、自动光照调节等

★2.3.9 三种人工质控方式，可指丁单独斑点，酶联斑点分析供应商，指丁区域，或指丁标准斑点人工干预计数标准

T细胞的ELISpot分析应用：

ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法，酶联斑点分析，能够区分活化的T细胞亚群。例如，Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2细胞产生其他细胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。

在vaccine研究中，ELISpot是一种标准工具，用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用，包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。

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