双分子荧光互补技术是一种在生物学领域中广泛应用的实验技术。该技术利用荧光标记的两个分子，通过荧光共振能量转移（FRET）原理，检测两个分子之间的相互作用。下面将详细介绍双分子荧光互补技术的原理、实验步骤、应用和发展趋势。

双分子荧光互补技术的原理

双分子荧光互补技术是基于荧光共振能量转移（FRET）原理的。当两个荧光基团在一个紧密的空间内相互靠近时，一个荧光基团发射的荧光能量会被另一个基团吸收，导致第二个基团也发射荧光。这种荧光能量转移现象称为荧光共振能量转移。通过检测两个荧光基团之间的能量转移效率，逆病毒载体构建，可以推断出两个分子之间的距离和相互作用情况。

除了洋葱亚细胞定位，还有许多其他亚细胞定位方法。其中，比较常见的有：

荧光法：将学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。用荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等也称为荧光细胞(或组织)化学技术。

GFP融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。

亚细胞结构分离定位法。

为什么不先对基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？

不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。

适用于什么实验场景？

（1）基因功能研究，文章里总少不了这一项。

（2）研究蛋白相互作用，与酵母双杂实验结果相互验证。

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