原位杂交技术的原理是什么？有何用途

　　原位杂交技术的原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有性或非性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列要具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。

荧光原位杂交（FISH）技术具有以下优点：

高特异性：荧光探针的合成是定向的，保证了杂交过程的特异性，可以有效地降低非特异性杂交和背景干扰。

高灵敏度：荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏，可以检测出低拷贝数的DNA序列，甚至可以检测单个基因序列。

快速简便：FISH技术操作简便，杂交过程可以在数小时或数天内完成，而且不需要过于复杂的设备，染色体原位杂交，便于在实验室开展。

原位杂交第二天

1.

1）将探针回收，原位杂交，放于－20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，染色体荧光原位杂交，放置30分钟，重复一次。

3）置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。

4）置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。

2.

1）用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。

2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4C 冰箱过夜。

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