






在原位杂交过程中,需要使用标记的核酸探针,通常是在性核素或非性物质中标记的。这些探针可以通过不同的方式制备,例如从已知序列的DNA或RNA制备,或者通过使用生物信息学方法设计和合成新的探针。
在进行原位杂交时,细胞或组织需要固定在适当的支持物上,例如载玻片。然后,探针与细胞或组织中的DNA或RNA进行杂交,通常是在加热条件下进行的。接下来,通过洗涤和显影步骤去除未结合的探针和信号增强剂,后用显微镜观察杂交信号的位置。
原位杂交技术(in situhybridization)是以标记的核酸分子为探针,在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
可以检测cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各种种属的标本,包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。
植物原位杂交除了在遗传育种方面的应用,还在其他领域有着广泛的应用,包括:
植物基因研究:植物基因是一种利用基因工程技术来人类遗传疾病的方法。通过植物原位杂交技术,可以将人类基因导入到植物细胞中,并在植物细胞中表达出相应的蛋白质,为基因提供重要的物质基础。
植物抗性研究:植物原位杂交技术可以用于研究植物对环境胁迫的抗性机制,染色体原位杂交,例如抗旱、抗盐、抗病等,有助于了解植物在环境胁迫下的生理和分子响应机制。
植物比较研究:通过植物原位杂交技术可以比较不同植物之间基因表达模式的差异,从而为植物分类和进化研究提供重要的参考依据。
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